Hershel Layton: Astuto y enigmático profesor de arqueología en Londres. Es todo un caballero inglés y no hay puzle ni misterio que pueda con él.
Luke Triton: Ayudante del profesor Layton. Es un niño entusiasmado que aspira a ser todo un caballero como el profesor. Nunca se separa de él, y se conocieron durante un extraño suceso en El profesor Layton y la flauta del Diablo (4ª entrega)
En esta aventura el profesor recibe una carta de la rica y dueña de Saint-Mysterè Lady Dhalia, para encontrar la famosa Manzana dorada, tesoro escondido astutamente por el barón Reinhold, el fundador de la villa. El profesor Layton se cree capaz de reunir pistas suficientes como para llegar hasta la manzana dorada, pero en su camino se encuentra con un problema, Paul. Más conocido como Don Paolo es el archienemigo del profesor, tras ser él el novio de su amada Claire (3ª entrega)

